摘要：目的应用ITS2条形码鉴定东北透骨草及其混伪品，为东北透骨草药材鉴定提供新方法。方法提取35份东北透骨草及其混伪品的基因组DNA，通过PCR扩增ITS2序列并进行双向测序，测序结果提交至GenBank；从GenBank下载13种东北透骨草及其混伪品ITS2序列42条；对提交与下载的77条序列，应用MEGA7.0软件进行序列比对，计算种内和种间遗传距离，构建Neighber-jioning（NJ）系统进化树，并预测ITS2二级结构。结果东北透骨草3种基原的种内最大K2P遗传距离均远远小于其与混伪品的种间最小K2P遗传距离；NJ树结果显示东北透骨草及其混伪品药用植物均可明显区分，表现出良好的单系性；比较ITS2二级结构发现，东北透骨草与其混伪品在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异。结论ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确鉴别东北透骨草，为保障安全用药提供了新的技术手段。

透骨草为中医外科常用药，具有祛风除湿、活血止痛之功，可用于风湿疼痛、疮疡肿毒等[1]。一直以来，透骨草基原极为复杂，品种混乱，同名异物现象较严重，据文献记载，作为药材透骨草或称为透骨草且在不同地区使用的原植物共有21科45种5变种，包括东北透骨草、珍珠透骨草、凤仙透骨草、铁线透骨草、羊角透骨草等[2-3]。有报道表明，这些来源于不同科属植物的透骨草在所含成分、药理作用、功效和毒性等方面存在较大的差异[4-5]。东北透骨草为豆科野豌豆属植物山野豌豆V.amoenaFisch.exDC.、广布野豌豆V.craccaL.、大叶野豌豆V.pseudoorobusFisch.etMey.的干燥地上部分，在辽宁、吉林、黑龙江3省广为使用。然而，凤仙花、地构叶、黄花铁线莲、角蒿等植物在许多地区也作透骨草使用，同名异物现象严重导致药材市场东北透骨草药材商品混乱；且野豌豆属种类繁多，各物种原植物形态、药材性状及显微特征方面极为相似，近缘种混伪品较多、真伪难辨，造成了药材质量不稳定，难以保证临床用药的安全、稳定和有效，故为了临床用药准确，对其从分子水平上进行鉴别尤为重要。

DNA条形码是当前生物分类学的热门技术，是利用一段有足够变异的、易扩增且相对较短的标准DNA片段（～bp）对物种进行快速、准确的自动鉴定[6]。作为DNA候选序列的ITS2片段因其具有较强引物通用性、较高测序成功率以及足够的序列变异性[7]，而被大家广泛